转基因食品中PAT基因核酸检测试剂盒

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  • 转基因大豆、玉米及其加工产品,/,40次/盒
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 本试剂盒采用实时荧光PCR技术,针对PAT基因的核酸序列设计特异性引物和探针,通过实时荧光PCR 反应对转基因成分进行定性检测。本试剂盒适用于大豆、玉米、番茄、马铃薯、水稻、小麦等农产品及其加工产品中转基因成分的定性PCR检测,加工产品不包含食用油脂和调味品。

参考标准

行业标准SNT 1202-2010

产品规格

 40/

主要成分 

成分规格
PCR反应预混液900ul× 1支
阳性对照50ul×1支
阴性对50ul×1支

储存条件

本试剂盒保存于-20℃,有效期12 个月

检测步骤

1.样本处理采用均质器、搅拌机、研钵等实验器皿对样本进行均质处理。

2.样本DNA提取采用商品化的植物基因组DNA提取试剂盒,按照试剂盒说明提取样本 DNA。对提取的 DNA 进行浓度测定, DNA 溶液的OD260/280 比值在 1.7-2.0 为最佳。

3.试剂准备冰上解冻反应试剂,反应液保持避光,解冻后将反应液混匀并简短离心,按每管22ul的量分装至 PCR 管中。

4.PCR加样每管中加入DNA样本 3ul  DNA 浓度为50ng/ul 左右),盖好管盖,简短离心,同时做阳性对照,阴性对照和空白对照(以水代替样本 DNA )。

5.PCR扩增将加好的样品放置在PCR仪中, 荧光通道选择FAM PCR 反应参数见表,使用不同的 PCR仪,反应参数可适当调整。

温度    时间循环数是否收集荧光
50℃2min 1个循环
95℃10min 1个循环
95℃15s40个循环
60℃1min

 6.结果分析

基线和阈值的设置:基线范围设置在3-15个循环,阈值设置在基线刚好超过阴性对照扩增曲线的最高点。

质量控制:阳性对照CT≤30,S 型扩增曲线;阴性对照无CT值,扩增曲线为直线;空白对照无CT值,扩增曲线为直线。若出现任一结果不正常,需重做实验。

结果判定

1.检测样品无CT值,曲线为直线或无 S 型扩增曲线,判定结果为阴性。

2.检测样品CT≤36,出现S型扩增曲线,判定结果为阳性。

3.检测样品36CT 40并有S型扩增曲线,需适当增加DNA模板量后重新做实时荧光PCR检测,再次检测结果CT值仍处于36和40之间,并且有S 型扩增曲线,判定结果为阳性,否则判定为阴性。 

最低检测限   

 0.1%

注意事项

1.初次使用前请仔细阅读说明书,并严格按照说明书进行操作。

2.实验操作要严格分区,防止污染。

3.建议先用实时荧光PCR法检测内源基因来判定样本提取的 DNA 是否满足 PCR检测要求。

4.反应液反复冻融会降低灵敏度,建议分管保存。

5.本试剂盒仅供定性筛查用。