转基因食品中NPTII基因核酸检测试剂盒

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  • 检测转基因玉米、番茄、马铃薯及其加工产品,/,40次/盒
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本试剂盒采用实时荧光PCR技术,针对NPTII基因的核酸序列设计特异性引物和探针,通过实时荧光PCR 反应对转基因成分进行定性检测。本试剂盒适用于大豆、玉米、番茄、马铃薯、水稻、小麦等农产品及其加工产品中转基因成分的定性PCR检测,加工产品不包含食用油脂和调味品。

参考标准

行业标准SNT 1202-2010

产品规格

40次/盒

主要成分

成分

规格

PCR反应预混液

900ul×1支

阳性对照

50ul×1支

阴性对照

50ul×1支 

储存条  

本试剂盒保存于-20℃,有效期12个月。 

检测步骤

 1.样本处理采用均质器、搅拌机、研钵等实验器皿对样本进行均质处理。

 2.样本DNA提取采用商品化的植物基因组DNA提取试剂盒,按照试剂盒说明提取样本DNA。对提取的DNA进行浓度测定,DNA溶液的OD260/280比值在1.7-2.0为最佳。

3.试剂准备冰上解冻反应试剂,反应液保持避光,解冻后将反应液混匀并简短离心,按每管22ul的量分装至PCR管中。

4.PCR加样每管中加入DNA样本3ul(DNA浓度为50ng/ul左右),盖好管盖,简短离心,同时做阳性对照,阴性对照和空白对照(以水代替样本DNA)。

 5.PCR扩增将加好的样品放置在PCR仪中,荧光通道选择FAM, PCR反应参数见表,使用不同的PCR仪,反应参数可适当调整。

温度

循环数

是否收集荧光

50℃

2min

1个循环

95℃

10min

1个循环

95℃

15s

40个循环

60℃

1min

 6.结果分析

基线和阈值的设置:基线范围设置在3-15个循环,阈值设置在基线刚好超过阴性对照扩增曲线的最高点。

质量控制:阳性对照CT≤30,有S型扩增曲线;阴性对照无CT值,扩增曲线为直线;空白对照无CT值,扩增曲线为直线。若出现任一结果不正常,需重做实验。 

结果判定

1.检测样品无CT值,曲线为直线或无S型扩增曲线,判定结果为阴性。

2.检测样品CT≤36,出现S型扩增曲线,判定结果为阳性。

3.检测样品36﹤CT﹤40并有S型扩增曲线,需适当增加DNA模板量后重新做实时荧光PCR检测,再次检测结果CT值仍处于36和40之间,并且有S型扩增曲线,判定结果为阳性,否则判定为阴性。

最低检出限

 0.1%

注意事项

1.初次使用前请仔细阅读说明书,并严格按照说明书进行操作。

2.实验操作要严格分区,防止污染。

3.建议先用实时荧光PCR法检测内源基因来判定样本提取的DNA是否满足PCR检测要求。

4.反应液反复冻融会降低灵敏度,建议分管保存。

5.本试剂盒仅供定性筛查用。