阪崎肠杆菌（Enterobactersakazaii）是奶粉（乳）制品中新发现的一种致病菌。由其引发的婴儿、早产儿脑膜炎、败血症及坏死性结肠炎散发和暴发的病例已在全球相继出现。本公司自主研发的阪崎肠杆菌核酸检测试剂盒采用实时荧光PCR技术，针对阪崎肠杆菌基因的核酸序列设计特异性引物和探针，通过实时荧光 PCR反应对奶粉（乳）制品中的阪崎肠杆菌进行定性检测，灵敏度高，特异性强，能快速检测出奶粉（乳）制品中的阪崎肠杆菌。

试剂盒组成

检测步骤

1.样本处理取100g(ml)样品，加入900ml 的无菌蒸馏水，震荡溶解，与 37度培养15h 左右。移取 1ml转入 10ml 改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤中， 37度震荡培养约5h 。

2.样本DNA提取取1.5ml增菌液，采用商品化的细菌DNA 提取试剂盒，按照试剂盒说明提取样本 DNA。对提取的DNA 进行浓度测定， DNA溶液的OD260/280 比值在 1.7-2.0 为最佳。

3.试剂准备冰上解冻反应试剂，反应液保持避光，解冻后将反应液混匀并简短离心，按每管20ul的量分装至PCR 管中。

4.PCR加样每管中加入DNA样本5ul ，盖好管盖，简短离心，同时做阳性对照，阴性对照和空白对照（以水代替样本 DNA）。

5.PCR扩增将加好的样品放置在PCR 仪中，荧光通道选择FAM ， PCR 反应参数见表，使用不同的PCR 仪，反应参数可适当调整。

6.结果分析

基线和阈值的设置：基线范围设置在3-15个循环，阈值设置在基线刚好超过阴性对照扩增曲线的最高点。

质量控制：阳性对照CT≤30，有S 型扩增曲线；阴性对照无CT值，扩增曲线为直线；空白对照无CT值，扩增曲线为直线。若出现任一结果不正常，需重做实验。

结果判定

1.检测样品无CT值，曲线为直线或无S 型扩增曲线，判定结果为阴性。

2.检测样品CT≤35，出现S型扩增曲线，判定结果为阳性。

3.检测样品35﹤CT ﹤40并有S型扩增曲线，需适当增加DNA模板量后重新做实时荧光PCR检测，再次检测结果CT值仍处于35和40之间，并且有S型扩增曲线，判定结果为阳性，否则判定为阴性。检出限

4cfu/ml(g)

包装规格

 40次/盒

注意事项

1.初次使用前请仔细阅读说明书，并严格按照说明书进行操作。

2.实验操作要严格分区，防止污染。

3.反应液反复冻融会降低灵敏度，建议分管保存。

4.本试剂盒仅供定性筛查用。

5.筛选阳性的样本需按国标法进行确证。

储藏条件与有效期

本试剂盒保存于-20℃，有效期 12个月。