沙门氏菌活菌检测试剂盒

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  • 奶粉、乳制品中沙门氏菌的检测,6cfu/25g(ml),40次/盒
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沙门氏菌(Salmonella)是最常见的食源性细菌病原体,沙门氏菌主要污染肉类食品,家禽、蛋类、乳类及其制品也可受沙门氏菌污染。本公司自主研制的沙门氏菌活菌荧光PCR检测试剂盒能快速检测出此类食品中存在的沙门氏菌菌属,且相比DNA-PCR的检测方法,本检测方法可以区分死菌和活菌,因此不需要进行再次验证。 本试剂盒采用实时荧光RT-PCR技术,针对沙门氏菌基因的核酸序列设计特异性引物和探针,通过实时荧光PCR反应对食品中的沙门氏菌进行定性检测,适用于牛奶、果汁、肉制品中沙门氏菌的定性检测。

产品规格 

40/

主要成分 

成分

规格

PCR反应预混液

900ul×1

阳性对照

50ul×1

阴性对照

50ul×1

保存条件 

 本试剂盒保存于-20,有效期12 个月。

检测步骤     

1.样本处理25ml(g)样品,加入225ml的培养基,均质后于 37度增菌培养约15h

2.样本RNA提取1ml增菌液,采用商品化的细菌RNA提取试剂盒,按照试剂盒说明提取样本 RNA。采用反转录试剂盒将RNA反转录成cDNA 待用。

3.试剂准备冰上解冻反应试剂,反应液保持避光,解冻后将反应液混匀并简短离心,按每管15ul的量分装至PCR管中。

4.PCR加样每管中加入cDNA样本10ul,盖好管盖,简短离心,同时做阳性对照,阴性对照和空白对照(以水代替样本 cDNA)。

5.PCR扩增将加好的样品放置在PCR仪中,荧光通道选择FAM PCR反应参数见表,使用不同的PCR仪,反应参数可适当调整。

温度

时间

循环数

是否收集荧光

37

5min

1个循环

95

3min

1个循环

94

5s

40个循环

60

40s

6.结果分析

基线和阈值的设置:基线范围设置在3-15个循环,阈值设置在基线刚好超过阴性对照扩增曲线的最高点。

质量控制:阳性对照CT30S 型扩增曲线;阴性对照无CT值,扩增曲线为直线;空白对照无CT值,扩增曲线为直线。若出现任一结果不正常,需重做实验。

结果判定      

1.检测样品无CT值,曲线为直线或无S 型扩增曲线,判定结果为阴性。

2.检测样品CT35,出现S型扩增曲线,判定结果为阳性。

3.检测样品35CT40并有S型扩增曲线,需适当增加DNA模板量后重新做实时荧光PCR检测,再次检测结果CT值仍处于3540之间,并且有S型扩增曲线,判定结果为阳性,否则判定为阴性。

最低检测限 

6cfu/25g(ml)

注意事项

1.初次使用前请仔细阅读说明书,并严格按照说明书进行操作。

2.实验操作要严格分区,防止污染。

3.RNA提取时要使用无RNA酶的枪头和管子,防止RNA 降解。

4.反应液反复冻融会降低灵敏度,建议分管保存。

5.本试剂盒仅供定性筛查用。